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關(guān)于HPLC的常見問題及解答
更新時(shí)間:2019-10-15   點(diǎn)擊次數(shù):1551次

一、問:液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么?

答:

1.篩板堵塞或柱失效,解決辦法是反向沖洗柱子,替換篩板或更換柱子。
2.存在干擾峰,解決辦法為使用較長的柱子,改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子

二、問:用HPLC進(jìn)行分析時(shí)保留時(shí)間有時(shí)發(fā)生漂移,有時(shí)發(fā)生快速變化,原因何在?如何解決?

答:關(guān)于漂移問題:
1.溫度控制不好,解決方法是采用恒溫裝置,保持柱溫恒定
2.流動(dòng)相發(fā)生變化,解決辦法是防止流動(dòng)相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等
3.柱子未平衡好,需對柱子進(jìn)行更長時(shí)間的平衡
關(guān)于快速變化問題
1.流速發(fā)生變化,解決辦法是重新設(shè)定流速,使之保持穩(wěn)定
2.泵中有氣泡,可通過排氣等操作將氣泡趕出。
3.流動(dòng)相不合適,解決辦法為改換流動(dòng)相或使流動(dòng)相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合

三、問:HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法

答:

1.樣品量不足,解決辦法為增加樣品量 醫(yī).學(xué)教育網(wǎng)搜集整理
2.樣品未從柱子中流出??筛鶕?jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子
3.樣品與檢測器不匹配。根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測器
4.檢測器衰減太多。調(diào)整衰減即可。
5.檢測器時(shí)間常數(shù)太大。解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)
6.檢測器池窗污染。解決辦法為清洗池窗。
7.檢測池中有氣泡。解決辦法為排氣。
8.記錄儀測壓范圍不當(dāng)。調(diào)整電壓范圍即可。
9.流動(dòng)相流量不合適。調(diào)整流速即可。
10.檢測器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測器,重作校正曲線。

四、問:做HPLC分析時(shí),柱壓不穩(wěn)定,原因何在?如何解決?

答:原因可能有:
1.泵內(nèi)有空氣,解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣,對溶劑進(jìn)行脫氣處理;
2.比例閥失效,更換比例閥即可;
3.泵密封墊損壞,更換密封墊即可;
4.溶劑中的氣泡,解決的辦法是對溶劑脫氣,必要時(shí)改變脫氣方法;
5.系統(tǒng)檢漏,找出漏點(diǎn),密封即可;
6.梯度洗脫,這時(shí)壓力波動(dòng)是正常的。

五、問:我購買的HPLC柱驗(yàn)收測試時(shí)柱壓過高,請問為什么?

 

答:柱壓過高是HPLC柱用戶zui常碰到的問題。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的問題,您可按下面步驟檢查問題的起因。 醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理
1.拆去保護(hù)預(yù)柱,看柱壓是否還高,否則是保護(hù)柱的問題,若柱壓仍高,再檢查;
2.把色譜柱從儀器上取下,看壓力是否下降,否則是管路堵塞,需清洗,若壓力下降,再檢查;
3.將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上,用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子,(此時(shí)不要連接檢測器,以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)池)。這時(shí),如果柱壓仍不下降,再檢查;
4.更換柱子入口篩板,若柱壓下降,說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì),正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高,請與廠商。一般情況下,在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線過濾器便可避免柱壓過高的問題,SGE提供的Rheodyne7315型過濾器就是解決這一問題的*選擇。 

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