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單克隆抗體的鑒定
更新時(shí)間:2019-09-02   點(diǎn)擊次數(shù):1538次

對(duì)制備的McAb進(jìn)行系統(tǒng)的鑒定是十分必要的,應(yīng)做下述幾個(gè)方面的鑒定:

1.抗體特異性的鑒定

除用免疫原(抗原)進(jìn)行抗體的檢測外,還應(yīng)該用與其抗原成分相關(guān)的其它抗原進(jìn)行交叉試驗(yàn),方法可用ELISA、IFA法。例如:

 制備抗黑色素瘤細(xì)胞的McAb,除用黑色素瘤細(xì)胞反應(yīng)外,還應(yīng)該用其它臟器的腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞進(jìn)行交叉反應(yīng),以便挑選腫瘤特異性或腫瘤相關(guān)抗原的單克隆抗體。

 制備抗重組的細(xì)胞因子的單克隆抗體,應(yīng)首先考慮是否與表達(dá)菌株的蛋白有交叉反應(yīng),其次是與其它細(xì)胞因子間有無交叉。

 

2.McAb的Ig類與亞類的鑒定

一般在用酶標(biāo)或熒光素標(biāo)記的第二抗體進(jìn)行篩選時(shí)已經(jīng)基本上確定了抗體的Ig類型。如果用的是酶標(biāo)或熒光素標(biāo)記的兔抗鼠IgG或IgM,則檢測出來的抗體一般是IgG類或IgM類。至于亞類則需要用標(biāo)準(zhǔn)抗亞類血清系統(tǒng)作雙擴(kuò)或夾心ELISA來確定。在作雙擴(kuò)試驗(yàn)時(shí),如加入適量的PEG(3%),更有利于沉淀線的形成。

 

3.McAb中和活性的鑒定

用動(dòng)物或細(xì)胞的保護(hù)實(shí)驗(yàn)來確定McAb的生物學(xué)活性。例如,如果確定抗病毒McAb的中和活性,則可用抗體和病毒同時(shí)接種于易感的動(dòng)物或敏感的細(xì)胞,來觀察動(dòng)物或細(xì)胞是否得到抗體的保護(hù)。

 

多克隆抗體的制備一般包括以下幾個(gè)步驟: 

1、制備抗原。

2、選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。 

3、動(dòng)物免疫。

4、試取血進(jìn)行測試,看看是否成功免疫。

5、如果成功免疫,殺死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,采集全部血清。

6、純化出抗體。

7、鑒定抗體,包括純度以及特異性。

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